牛角膜渾濁和滲透性（Bovine Corneal Opacity and Permeability，BCOP）試驗是經濟合作與發展組織（OECD）認可的眼刺激試驗的替代方法之一，適用于識別嚴重和非常嚴重的眼刺激性的物質，以及準確分類無刺激性或嚴重刺激性物質，即處于刺激譜兩端的結果，然而該方法還未被證明可以準確區分輕微和中等刺激（GSH的2B和2A類）。

　　作為第三方檢測中心，中科測試機構擁有CMA和CNAS認證檢測資質，檢測設備齊全，數據科學可靠，可出具國家認可的化妝品眼刺激性試驗報告。

　　化妝品眼刺激性試驗

　　角膜細胞的特征是有絲狀肌動蛋白在活細胞中保持聚合，一旦ATP再生停止會迅速解聚。在離體的牛角膜中，已固定活細胞的絲狀肌動蛋白可被羅丹明標記的鬼筆環肽染色來標記。

　　同時，有研究表明，物質的眼刺激性程度與損傷深度（depth of injury，DOI）直接相關，可依據損傷深度來對眼刺激性進行分類。

　　BCOP方法用于化妝品眼刺激性評價主要通過鬼筆環肽對角膜冰凍切片的完整絲狀肌動蛋白骨架染色來進行標記，進而明確暴露于受試物后的牛角膜的上皮和基質損傷深度，對損傷深度進行量化，進而對輕微和中等刺激進行準確細分。

　　BCOP試驗方法

　　選用完好的角膜（無肉眼可見混濁、劃痕和其他異常情況），取角膜時保留2~3mm的鞏膜邊緣以便于后續處理，小心注意避免損傷角膜上皮和內皮。分離的角膜安裝在特殊設計的角膜固定器中，角膜固定器包括前室和后室，連接處分別是角膜的上皮和內皮。兩腔室內都充滿了預熱的MEM培養液，確保沒有氣泡。在（32±1）℃培養箱中平衡1h后，更換前后室培養液測量初始濁度值。

　　分組后移除前室培養液后加入750mL受試物。暴露10min后，用MEM沖洗至樣品無殘留后，加滿無酚紅MEM培養液后暴露2h。將前后室培養液換新后讀取終末濁度值。移除前室培養液，加入1mL的4mg/mL熒光素鈉溶液，孵育90min后，收集后室液體，混勻后取360L在490nm波長處讀取吸光度值，按公式計算體外刺激評分值（in vitro irritancy score，IVIS ）。

　　每個樣品平行6只角膜，陰性對照：純化水，陽性對照：無水乙醇，3只角膜在完成BCOP測試后用于計算IVIS，另外3只角膜在后暴露完成后用于固定染色。按照0ECD指南標準：IVIS≤3，為無刺激性（GSH的不分類級別）；355，為嚴重刺激（CSH的1類）。

　　Draize試驗方法

　　參照《化妝品安全技術規范》（2015年版）中“急性眼刺激性/腐蝕性”項下所示方法，實驗前24 h肉眼檢查后，再用熒光素鈉及裂隙燈對雙眼進行檢查：每個樣品取沒有眼病的健康家免3只，將0.1mL的樣品加入一側結膜囊中，眼閉合1s，至第30s時用足量流速較快但又不會引起動物眼損傷的水流沖洗30s，另側眼睛不處理作自身對照，在滴入受試物后1，24，4872 h以及第4和7天對動物眼睛進行檢查。

　　如果72h未出現刺激反應，即可終止試驗。對于7d不恢復者，需延長觀察時間，一般不超過21d。按《化妝品安全技術規范》（2015年版）要求判定受試物對眼的刺激強度。